Hvordan bestemmer man den optimale koncentration?
For induceren IPTG (isopropyl-beta-d-thiogalactosid), jo højere koncentrationen er, jo bedre.Den optimale koncentration afhænger af de specifikke forsøgsbetingelser og den ønskede induktionseffekt.
Generelt anvendes koncentrationen af IPTG i området 0,1-1 mM.Lavere koncentrationer kan reducere negative virkninger på cellevækst og kan reducere cytotoksicitet på grund af overekspression af målproteiner.Højere koncentrationer kan forårsage overdreven cellemetabolisk belastning, hvilket påvirker cellevækst og ekspressionseffektivitet.
Måden at bestemme den optimale koncentration på kan være at evaluere ekspressionsniveauet af målproteinet ved at udføre IPTG-induktionstest ved forskellige koncentrationer.Småskala kulturtests kan udføres under anvendelse af en række IPTG-koncentrationer (f.eks. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM osv.), og ekspressionseffekten ved forskellige koncentrationer kan evalueres ved at detektere ekspressionsniveauet af målproteinet (f.eks. Western blot eller fluorescensdetektion).Ifølge de eksperimentelle resultater blev koncentrationen med den bedste ekspressionseffekt valgt som den optimale koncentration.
Derudover kan du også henvise til den relevante litteratur eller erfaringer fra andre laboratorier for at forstå det almindeligt anvendte IPTG-koncentrationsområde under lignende eksperimentelle forhold og derefter optimere og justere i henhold til de eksperimentelle behov.
Det er vigtigt at bemærke, at den optimale koncentration kan variere afhængigt af forskellige ekspressionssystemer, målproteiner og eksperimentelle forhold, så det er bedst at optimere fra sag til sag.
Indlægstid: 28. september 2023