Der er mange ubesungne helte omkring os, som ser ud til at være almindelige, men faktisk bidrager de tavst meget til os.Proteinase K er den "ubesongede helt" i den molekylære diagnostiske industri, selv om proteinase K sammenlignet med de "store og kraftfulde" i industrien er så lavmælt, at vi længe har overset dens betydning.Med udbruddet af den nye kroneepidemi er efterspørgslen efter proteinase K steget, og udbuddet herhjemme og i udlandet er langt bagud forbruget, og alle indså pludselig, at proteinase K er så vigtig.
Hvad er brugen af proteinase K?
Proteinase K er en serinprotease med proteolytisk enzymaktivitet og kan opretholde aktivitet i en lang række miljøer (pH (4-12,5), højsaltbuffer, høj temperatur på 70°C osv.).Derudover hæmmes aktiviteten af proteinase K ikke af SDS, urinstof, EDTA, guanidinhydrochlorid, guanidinisothiocyanat osv., og en vis mængde vaskemiddel kan også øge aktiviteten af proteinase K. Ved medicinsk behandling (virus- og mikrobiel desinfektion) ), mad (mørning af kød), læder (blødgøring af hår), vinfremstilling (alkoholafklaring), aminosyrepræparation (nedbrudte fjer), nukleinsyreekstraktion, in situ hybridisering osv., proteinase K Der er applikationer.Den mest almindeligt anvendte anvendelse er nukleinsyreekstraktion.
Proteinase K kan enzymolysere alle slags proteiner i prøven, inklusive de histoner, der er tæt bundet til nukleinsyrer, så nukleinsyrerne kan frigives fra prøven og frigives til ekstraktet, hvilket letter det næste trin af ekstraktion og oprensning.Ved påvisning af viral nukleinsyre er proteinase K en af de vigtige komponenter i virusprøveopløsningen.Proteinase K kan knække og inaktivere virusets pelsprotein, hvilket er sikrere under transport- og påvisningsstadiet;desuden kan proteinase K også nedbryde RNase forhindrer nedbrydning af viralt RNA og letter nukleinsyredetektion.
Den overnight berømmelse af proteinase K
Uanset om det er inden for videnskabelig forskning eller inden for IVD, er nukleinsyreekstraktion det mest grundlæggende eksperiment, så proteinase K har altid været en meget vigtig eksistens.Men tidligere var proteinase K langt mindre kendt end dens rolle.En stor del af dette skyldtes, at udbuds- og efterspørgselsforholdet mellem proteinase K var meget stabilt.De færreste ville tro, at forsyningen af proteinase K ville være et problem.
Med udbruddet af den nye kroneepidemi er efterspørgslen efter nukleinsyretestning steget.I slutningen af juni 2020 har Kina gennemført næsten 90 millioner nye kronetests, og dette tal er endnu mere alarmerende på globalt plan.I nukleinsyreekstraktionsforsøg er arbejdskoncentrationen af proteinase K omkring 50-200 μg/mL.Generelt tager det omkring 100 μg proteinase K at udtrække en prøve af nukleinsyre.Ved faktisk brug, for at øge effektiviteten af nukleinsyreekstraktion, vil proteinase K ofte blive brugt i en øget mængde.Nukleinsyrepåvisning af den nye coronavirus har medført en stor mængde proteinase K-efterspørgsel.Den oprindelige udbuds- og efterspørgselsbalance af proteinase K blev hurtigt brudt, og proteinase K blev et vigtigt epidemisk forebyggelsesmateriale natten over.
Vanskeligheder ved produktionen af proteinase K
Selvom med udviklingen af epidemien er den vigtige værdi af proteinase K blevet værdsat af mennesker, er det pinligt, at på grund af den overdrevne lavmælte af proteinase K, har få indenlandske virksomheder været involveret i produktionen af proteinase K. Når mennesker ønsker at etablere proteinase K-produktion Under produktionsprocessen blev det opdaget, at proteinase K er et yderst specielt protein.Det er ekstremt udfordrende at udvide produktionskapaciteten af proteinase K på kort tid.
Den store produktion af proteinase K står over for følgende vanskeligheder
1. Lavt udtryk
Proteinase K kan ikke-specifikt nedbryde de fleste proteiner og forårsage alvorlig toksicitet for ekspressionsværtscellen.Derfor er ekspressionsniveauet af proteinase K generelt meget lavt.Screening af ekspressionssystemer og stammer, der i høj grad udtrykker proteinase K, kræver generelt en længere cyklus.
2. Rester af pigmenter og nukleinsyrer
Storskala fermentering introducerer en stor mængde pigment- og værtsnukleinsyrerester.Det er vanskeligt at fjerne disse urenheder med en simpel oprensningsproces, og kompleks oprensning øger omkostningerne og reducerer genvindingshastigheden.
3. Ustabilitet
Proteinase K er ikke stabilt nok, det kan enzymolysere sig selv, og det er svært at opbevare det stabilt ved 37°C i lang tid uden et beskyttelsesmiddel.
4. Let at udfælde
Ved fremstilling af det frysetørrede pulver af proteinase K, for at sikre, at faststofindholdet af proteinase K i det frysetørrede pulver er stort, er det nødvendigt at tilsætte et frysetørret beskyttelsesmiddel i en høj koncentration, men når koncentrationen af proteinase K når 20mg/mL og derover, er det let. Aggregeringen danner et bundfald, hvilket medfører store vanskeligheder ved frysetørringen af proteinase K med et højt faststofindhold.
5. Stor investering
Proteinase K har stærk proteaseaktivitet og kan hydrolysere andre proteaser i laboratoriet.Derfor kræver proteinase K specialiserede produktionsområder, udstyr og personale til forskning og udvikling og produktion.
XD BIOCHEMs proteinase K-opløsning
XD BIOCHEM har en moden proteinekspressions- og oprensningsplatform og har stor erfaring med ekspression og oprensning af rekombinante proteiner og optimering af produktionsprocesser.Gennem den hurtige dannelse af et forsknings- og udviklingsteam er den store produktionsproces af proteinase K blevet overvundet.Den månedlige produktion af frysetørret pulver er mere end 30 kg.Produktet har stabil ydeevne, høj enzymspecifik aktivitet og ingen værtscytokrom- og nukleinsyrerester.Velkommen til at kontakte XD BIOCHEM Få en prøvepakke (E-mail:sales@xdbiochem.comTlf.: +86 513 81163739).
XD BIOCHEMs tekniske løsninger omfatter bl.a
Ved hjælp af multi-kopi plasmidintegration udvælges højekspressionsstammer med et ekspressionsniveau på 8g/L, hvilket overvinder problemet med lavt ekspressionsniveau af proteinase K.
Gennem etableringen af en flertrins oprensningsproces blev værtscytokrom- og nukleinsyreresterne af proteinase K med succes fjernet under standardværdien.
Gennem high-throughput screening af beskyttende bufferformuleringer blev en buffer, der stabilt kan opbevare proteinase K ved 37°C, udvalgt.
Screeningsbuffere overvinder problemet med, at proteinase K er let at aggregere og udfælde i høje koncentrationer, og lægger grundlaget for proteinase K's høje faststofindhold frysetørring.
XD BIOCHEM proteinase K prøve
XD BIOCHEM proteinase K stabilitetstest: der vil ikke være nogen signifikant ændring i aktivitet efter 80 dage ved stuetemperatur
XD BIOCHEM proteinase K stabilitetstest: der vil ikke være nogen signifikant ændring i aktivitet efter 80 dage ved stuetemperatur.
Sammenligning af nukleinsyreekstraktionseffekten af XD BIOCHEM proteinase K og konkurrerende produkter.I processen med nukleinsyreekstraktion anvendes henholdsvis XD BIOCHEM og konkurrerende proteinase K.Ekstraktionseffektiviteten af XD BIOCHEM proteinase K er højere, og Ct-værdien af målgenet er lavere.
Indlægstid: 31. december 2021