4-Nitrophenyl beta-D-galactopyranosid CAS:200422-18-0

Effekt: ONPG er et substrat, der specifikt bruges til at påvise tilstedeværelsen og aktiviteten af ​​enzymet β-galactosidase.Når β-galactosidase enzym er til stede og aktivt, spalter det ONPG i to produkter: o-nitrophenol og et galactosederivat.Frigivelsen af ​​o-nitrophenol resulterer i en gul farveændring, som kan måles ved hjælp af et spektrofotometer.

Anvendelse: ONPG har flere anvendelser inden for molekylærbiologi og biokemiforskning:

Bestemmelse af β-galactosidase aktivitet: ONPG bruges almindeligvis til at måle og kvantificere aktiviteten af ​​β-galactosidase enzym.Hastigheden af ​​o-nitrophenoldannelse, som er direkte proportional med enzymaktiviteten, kan måles spektrofotometrisk.

Genekspression og regulering: ONPG bruges ofte i eksperimenter relateret til genekspression og reguleringsundersøgelser.Det bruges ofte i fusionsproteinassays, såsom det almindeligt anvendte lacZ-fusionssystem, til at studere ekspressionen af ​​gener under kontrol af specifikke promotorer.Beta-galactosidaseaktiviteten målt ved hjælp af ONPG giver indsigt i niveauet af genekspression.

Screening for β-galactosidase-aktivitet: ONPG kan bruges som en kolorimetrisk screeningsmetode i rekombinant DNA-teknologi til at identificere tilstedeværelsen og funktionaliteten af ​​LacZ-genet, som koder for β-galactosidase.Denne screeningsmetode hjælper med at identificere kloner, der indeholder genet af interesse.

Enzymkinetikundersøgelser: ONPG er også nyttig til at studere kinetikken af ​​β-galactosidase enzym.Ved at måle hastigheden af ​​enzym-substratreaktion ved forskellige substratkoncentrationer er det muligt at bestemme kinetiske parametre såsom Michaelis-Menten konstanter (Km) og maksimale reaktionshastigheder (Vmax).