4-nitrophenyl beta-D-galactopyranosid CAS: 200422-18-0

Effekt: ONPG er et substrat, der specifikt bruges til at detektere tilstedeværelsen og aktiviteten af ​​enzymet β-galactosidase. Når β-galactosidase-enzymet er til stede og aktivt, spalter det ONPG i to produkter: o-nitrophenol og et galactosederivat. Frigørelsen af ​​o-nitrophenol resulterer i en gul farveændring, som kan måles ved hjælp af et spektrofotometer.

Anvendelse: ONPG har adskillige anvendelser inden for molekylærbiologisk og biokemisk forskning:

Bestemmelse af β-galactosidaseaktivitet: ONPG bruges almindeligvis til at måle og kvantificere aktiviteten af ​​β-galactosidase-enzymet. Hastigheden for dannelse af o-nitrophenol, som er direkte proportional med enzymaktiviteten, kan måles spektrofotometrisk.

Genekspression og -regulering: ONPG anvendes ofte i eksperimenter relateret til genekspression og -reguleringsstudier. Det anvendes ofte i fusionsproteinanalyser, såsom det almindeligt anvendte lacZ-fusionssystem, til at studere ekspressionen af ​​gener under kontrol af specifikke promotorer. Beta-galactosidaseaktiviteten målt ved hjælp af ONPG giver indsigt i niveauet af genekspression.

Screening for β-galactosidaseaktivitet: ONPG kan bruges som en kolorimetrisk screeningsmetode i rekombinant DNA-teknologi til at identificere tilstedeværelsen og funktionaliteten af ​​LacZ-genet, som koder for β-galactosidase. Denne screeningsmetode hjælper med at identificere kloner, der indeholder det pågældende gen.

Enzymkinetikstudier: ONPG er også nyttig til at studere kinetikken af ​​β-galactosidase-enzymet. Ved at måle hastigheden af ​​enzym-substrat-reaktion ved forskellige substratkoncentrationer er det muligt at bestemme kinetiske parametre såsom Michaelis-Menten-konstanter (Km) og maksimale reaktionshastigheder (Vmax).