Phenylgalactosid CAS: 2818-58-8

Phenylgalactosid, også kendt som p-nitrophenyl β-D-galactopyranosid (pNPG), er et syntetisk substrat, der ofte anvendes i biokemiske og molekylærbiologiske eksperimenter. Det bruges almindeligvis til at detektere og måle aktiviteten af enzymet β-galactosidase.

Når phenylgalactosid hydrolyseres af β-galactosidase, frigiver det p-nitrophenol, som er en gulfarvet forbindelse. Frigørelsen af p-nitrophenol kan måles kvantitativt ved hjælp af et spektrofotometer, da absorbansen af p-nitrophenol kan detekteres ved en bølgelængde på 405 nm.

Bestil eller anmod om tilbud

Produktdetaljer

Produktmærker

Anvendelse og effekt

Effekt på enzymaktivitet: Phenylgalactosid bruges almindeligvis til at måle aktiviteten af enzymet β-galactosidase. Når phenylgalactosid hydrolyseres af β-galactosidase, frigiver det p-nitrophenol. Akkumuleringen af p-nitrophenol kan måles kvantitativt, hvilket giver indsigt i aktiviteten af β-galactosidase. Denne effekt udnyttes i applikationer såsom enzymanalyser og screeningssystemer.

Genekspressionsanalyse: Phenylgalactosid bruges ofte som substrat i molekylærbiologiske eksperimenter til at studere genekspression. LacZ-genet, som koder for β-galactosidase, fusioneres almindeligvis med regulatoriske sekvenser fra andre interessante gener. Ekspressionen af lacZ-genet og hydrolysen af phenylgalactosid af β-galactosidase kan indikere ekspressionsmønsteret og niveauet af det undersøgte målgen.

Screeningssystemer: Phenylgalactosid er en vigtig komponent i screeningssystemer, der anvender β-galactosidaseaktivitet. Et almindeligt kendt eksempel er den blå-hvide screeningsmetode, som bruges til at identificere rekombinante eller transformerede celler i molekylærbiologiske eksperimenter. Kolonier, der med succes har optaget det rekombinante DNA eller gennemgået genetisk rekombination, vil udtrykke β-galactosidase, hvilket fører til hydrolyse af phenylgalactosid og dannelsen af en blå farve.

Proteinoprensning: I nogle tilfælde kan phenylgalactosid anvendes som en ligand til affinitetskromatografi for at oprense proteiner, der specifikt binder til eller aktiveres af β-galactosidase. Proteinet af interesse kan have et affinitetsmærke eller et fusionsmærke, der indeholder et β-galactosidase-bindende domæne. Ved at føre proteinblandingen gennem en søjle med immobiliseret phenylgalactosid kan det ønskede protein selektivt tilbageholdes og efterfølgende elueres.